HEPES中文全称4-羟乙基哌嗪乙磺酸，CAS为7365-45-9，HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，hepes缓冲液的主要成分是羟乙基哌嗪乙硫磺酸，HEPES是一种两性缓冲液,溶于水，不与金属离子形成稳定的配合物，其在pH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力。多用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA 提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。

应用于多种生物化学反应：

1、 HEPES常用于各种类型生物体的细胞培养基中用作缓冲试剂, 细胞-细胞黏附，细胞短期聚集培养，清洗组织、细胞所用缓冲液；

2、 在蛋白质研究中，PIPES 常用作阳离子交换色谱法中结合缓冲液的组分和洗脱液；

3、 在DNA研究中，PIPES用作磷酸钙和DNA沉淀物形成体系的缓冲液，AFM以及电穿孔实验中的缓冲液。

4、 另外，HEPES对DNA和限制酶之间的反应有一定干扰，也不适合用于Lowry氏法测定蛋白质含量。

5、 HEPES 缓冲液常用于细胞器和极易变性的、对pH敏感的蛋白质和酶的研究工作，以及生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。

6、 分离与分析RNA核组分的反应缓冲液、预杂交缓冲液、杂交缓冲液；用于RNA与T4RNA。分子生物学级用于用T4RNA连接酶进行RNA3'-末端标记，分离与分析核RNA之反应缓冲液组分、预杂交缓冲液缓和杂交缓冲液成分。

HEPES相关问题

1. 大多数细胞所需pH在7.2-7.4,但细胞培养合适pH值随培养的细胞种类不同而不同，成纤维细胞喜欢较高pH(7.4-7.7)，而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0-7.4)，由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L；如果CO2浓度维持在10%培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不

应拧得太紧，以保证气体交换；

2. 利用HCO3和CO2缓冲对的培养液pH值不稳定，储存一定时间后容易偏碱。如果培养液的PH变化太快，就可以在培养液中加HEPES缓冲液至10---25mM的终浓度；

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3. HEPES是一种两性缓冲液，大多用于氧化磷酸化、无菌环境的蛋白质合成、光合磷酸化、CO2固定等生物学研究中；HEPES对金属离子酶作用底物无影响，适用于透射电子显微技术（TEM）中；在细胞培养基中，优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值，HEPES（25mM）可以作为碳酸氢盐缓冲液的替代品，或作为碳酸氢盐缓冲液的添加物（10-15mM），以解除需要高浓度CO2培养环境的限制，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。