蛋白Marker试剂是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了实验,可以帮助我们在电泳时、电泳后以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率。
未染色的蛋白分子量标准是简单的,也是准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是准确判断蛋白大小必须的。未预染的蛋白Marker可分为宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准。
1、宽分子量蛋白标准,如果从实验的整体考虑的,就选择范围尽量宽条带分布比较均匀的,这样容易判断你的蛋白在哪个区间。不过蛋白Marker试剂的条带越多,每次上样量也就越费。如果买的是大包装,建议分装成小体积使用,多次反复冻融不利于蛋白Marker的保存和继续使用。
2、高分子量蛋白标准,通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准。
3、低分子量蛋白标准,在一般的蛋白电泳当中,更常用的是低蛋白标准分子量,除了有指示蛋白大小的作用以外,有时还可以用作粗略的定量。特别小的蛋白Marker试剂条带如果要显色好,一定要**足够的上样量。
由于预染蛋白Marker是与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合定位蛋白。
不过多数情况下蛋白Marker试剂的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对蛋白Marker指示的参考大小,都是需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
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关于蛋白Marker试剂的蛋白标准分析