面对纷繁复杂的样本,每天的核酸提取可以说是费时费力。如果短时间内想稳定拿到实验结果,那么快速、稳定的提取方法就显得十分重要。
提取过程中需要注意的细节较多,一处出错都会导致结果的失败。常见的问题主要有产物得率低,产物降解或者试剂残留。针对这些问题,下文整理给出了具体的应对方法,帮助大家避坑。
一、提取的核酸得率低
1、样品量与试剂的配比要控制在一定范围,避免超过裂解能力;
2、破碎研磨的步骤处理细节很重要,一定要充分研磨,这是核酸提取的首要条件;
3、在洗脱的步骤,使用足量的洗脱液洗脱并充分混匀,避免有团块残存;
4、实验耗材要匹配,如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同,也会影响核酸的得率。
二、提取核酸出现降解
1、提取的样品量要符合试剂的配比,尽量控制样品量达到合适比例;
2、每个步骤都要注意充分的混合均匀,避免团块的残留影响实验结果;
3、在洗脱时,时间过长或者温度过高,核酸有可能会降解;
4、样本切记不可反复冻融,提取的样本要注意在合适的温度保存,长期保存尽量-80℃。
三、提取到的核酸纯度不够高,甚至抑制物残留影响下游实验
1、样本量和裂解液等试剂的配比要尽量控制到合适的范围;
2、混合均匀以确保裂解充分和没有团块残留;
3、晾干的步骤要充分,否则可能会导致醇类等杂质的残留;
4、磁棒振荡幅度太小或混合时间太短,磁珠上有杂质残留会影响磁珠吸附核酸的能力。
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三个细节帮助你避免核酸提取失败